استئوآرتریت (OA) یکی از بیماری‌های مزمن مفصل استخوانی است که افراد مسن بالای 65 سال را تحت تاثیر قرار می‌دهد.
1]. به طور کلی، بیماران OA با غضروف آسیب دیده، سینوویوم ملتهب و سلول های غضروفی فرسایش یافته تشخیص داده می شوند که باعث درد و ناراحتی فیزیکی می شود.
2]. درد آرتروز عمدتاً به دلیل تخریب غضروف مفاصل در اثر التهاب ایجاد می‌شود و زمانی که غضروف آسیب جدی ببیند، استخوان‌ها می‌توانند با یکدیگر برخورد کنند و باعث درد غیرقابل تحمل و مشکلات جسمی شوند.
3]. دخالت واسطه های التهابی با علائمی مانند درد، تورم و سفتی مفصل به خوبی مستند شده است. در بیماران OA، سیتوکین های التهابی که باعث فرسایش غضروف و استخوان زیر غضروفی می شوند در مایع سینوویال یافت می شوند.
4]. دو شکایت عمده که بیماران OA معمولا دارند درد و التهاب سینوویال است. بنابراین اهداف اولیه درمان های OA فعلی کاهش درد و التهاب است. [
5]. اگرچه درمان های موجود OA، از جمله داروهای غیر استروئیدی و استروئیدی، در کاهش درد و التهاب اثربخشی ثابت شده است، اما استفاده طولانی مدت از این داروها پیامدهای سلامتی شدیدی مانند اختلالات قلبی عروقی، گوارشی و کلیوی دارد.
6]. بنابراین، داروی مؤثرتر با عوارض جانبی کمتر باید برای درمان آرتروز ساخته شود.
محصولات بهداشتی طبیعی به دلیل ایمن بودن و دسترسی آسان به طور فزاینده ای محبوب می شوند.
7]. داروهای سنتی کره ای در برابر چندین بیماری التهابی از جمله آرتریت اثربخشی ثابت کرده اند.
8]. اوکلندیا لاپا دی سی. به دلیل خواص دارویی خود مانند افزایش گردش خون چی برای تسکین درد و تسکین معده شناخته شده است و به طور سنتی به عنوان یک مسکن طبیعی استفاده می شود.
9]. گزارش های قبلی نشان می دهد که A. lappa دارای ضد التهاب است [
10,
11]، مسکن [
12]، ضد سرطان [
13و محافظ معده [
14] اثرات فعالیت‌های بیولوژیکی مختلف A. lappa توسط ترکیبات فعال اصلی آن ایجاد می‌شود: کوستونولید، لاکتون دهیدروکوستوس، دی هیدروکوستونولید، کوستوسلاکتون، α-کوستول، لاکتون سوسوره و کوستوسلاکتون.
15]. مطالعات قبلی ادعا می‌کنند که کوستونولید دارای خواص ضد التهابی در لیپوپلی‌ساکارید (LPS) است که ماکروفاژها را از طریق تنظیم NF-kB و مسیر پروتئین شوک حرارتی القا می‌کند.
16,
17]. با این حال، هیچ مطالعه ای فعالیت های بالقوه A. lappa برای درمان OA را بررسی نکرده است. پژوهش حاضر به بررسی اثرات درمانی A. lappa بر ضد استئوآرتریت با استفاده از (مونوسدیم-یدواستات) MIA و مدل های جوندگان ناشی از اسید استیک پرداخته است.
مونوسدیم-یدواستات (MIA) به طور معروف برای ایجاد بسیاری از رفتارهای درد و ویژگی های پاتوفیزیولوژیک OA در حیوانات استفاده می شود.
18,
19,
20]. هنگامی که MIA به مفاصل زانو تزریق می شود، متابولیسم غضروفی را به هم می زند و باعث التهاب و علائم التهابی، مانند فرسایش غضروف و استخوان زیر غضروفی، علائم اصلی OA می شود.
18]. پاسخ انقباض القا شده با اسید استیک به طور گسترده به عنوان شبیه سازی درد محیطی در حیوانات در نظر گرفته می شود که در آن درد التهابی را می توان به صورت کمی اندازه گیری کرد.
19]. رده سلولی ماکروفاژ موش، RAW264.7، عموماً برای مطالعه پاسخ های سلولی به التهاب استفاده می شود. پس از فعال شدن با LPS، ماکروفاژهای RAW264 مسیرهای التهابی را فعال کرده و چندین واسطه التهابی مانند TNF-α، COX-2، IL-1β، iNOS و IL-6 ترشح می کنند.
20]. این مطالعه اثرات ضد درد و ضد التهابی A. lappa در برابر OA را در مدل حیوانی MIA، مدل حیوانی ناشی از اسید استیک و سلول‌های RAW264.7 فعال شده با LPS ارزیابی کرده است.
2. مواد و روشها
2.1. مواد گیاهی
ریشه خشک شده A. lappa DC. مورد استفاده در آزمایش از شرکت دارویی Epulip، آموزشی ویبولیتین، (سئول، کره) تهیه شد. توسط پروفسور Donghun Lee، بخش فارماکولوژی گیاهی، سرهنگ پزشکی کره، دانشگاه گاچون شناسایی شد و شماره نمونه کوپن 18060301 ثبت شد.
2.2. تجزیه و تحلیل HPLC عصاره A. lappa
A. lappa با استفاده از دستگاه رفلاکس (آب مقطر، 3 ساعت در 100 درجه سانتیگراد) استخراج شد. محلول استخراج شده با استفاده از اواپراتور کم فشار فیلتر و متراکم شد. عصاره A. lappa پس از خشک کردن انجمادی در دمای 80- درجه سانتی گراد عملکرد 44.69٪ داشت. تجزیه و تحلیل کروماتوگرافی A. lappa با یک HPLC متصل با استفاده از یک سیستم HPLC 1260 InfinityⅡ (Agilent، Pal Alto، CA، USA) انجام شد. برای جداسازی رنگی، ستون EclipseXDB C18 (4.6 × 250 میلی متر، 5 میکرومتر، Agilent) در دمای 35 درجه سانتی گراد استفاده شد. در مجموع 100 میلی گرم از نمونه در 10 میلی لیتر متانول 50 درصد رقیق شد و به مدت 10 دقیقه تحت سونیکاسیون قرار گرفت. نمونه ها با فیلتر سرنگ (Waters Corp., Milford, MA, USA) 0.45 میکرومتر فیلتر شدند. ترکیب فاز متحرک 0.1٪ اسید فسفریک (A) و استونیتریل (B) بود و ستون به شرح زیر شسته شد: 0-60 دقیقه، 0٪. 60-65 دقیقه، 100٪؛ 65-67 دقیقه، 100%؛ 67-72 دقیقه، 0٪ حلال B با سرعت جریان 1.0 میلی لیتر در دقیقه. پساب با استفاده از حجم تزریق 10 میکرولیتر در طول موج 210 نانومتر مشاهده شد. تجزیه و تحلیل در سه تکرار انجام شد.
2.3. مسکن و مدیریت حیوانات
موش های نر نژاد Sprague-Dawley (SD) با سن 5 هفته و موش های نر ICR 6 هفته از Samtako Bio Korea (Gyeonggi-do، کره) خریداری شدند. حیوانات در اتاقی با دمای ثابت (2±22 درجه سانتیگراد) و رطوبت (10±55٪) و چرخه نور/تاریکی 12/12 ساعت نگهداری شدند. حیوانات بیش از یک هفته قبل از شروع آزمایش با این شرایط آشنا شدند. حیوانات به صورت آزادانه خوراک و آب داشتند. قوانین اخلاقی فعلی برای مراقبت و نگهداری از حیوانات در دانشگاه گاچون (GIACUC-R2019003) به شدت در تمام مراحل آزمایشی حیوانات رعایت شد. این مطالعه به صورت کارآزمایی کورکور محقق و موازی طراحی شد. روش اتانازی را طبق دستورالعمل کمیته اخلاق تجربی حیوانات دنبال کردیم.
2.4. MIA تزریق و درمان
موش ها به طور تصادفی به 4 گروه شم، کنترل، ایندومتاسین و A. lappa تقسیم شدند. با بیهوش شدن با مخلوط ایزوفلوران O2 2٪، موش‌ها با استفاده از 50 میکرولیتر MIA (40 میلی‌گرم در متر؛ سیگما آلدریچ، سنت لوئیس، MO، ایالات متحده آمریکا) به صورت داخل مفصلی به مفاصل زانو تزریق شدند تا منجر به استئوآرتریت تجربی شود. تیمارها به شرح زیر انجام شد: گروه کنترل و شم تنها با رژیم غذایی پایه AIN-93G حفظ شدند. تنها گروه ایندومتاسین با ایندومتاسین (3 میلی‌گرم بر کیلوگرم) همراه با رژیم غذایی AIN-93G و گروه A. lappa 300 میلی‌گرم بر کیلوگرم به رژیم غذایی AIN-93G همراه با A. lappa (300 میلی‌گرم بر کیلوگرم) اختصاص داده شد. تیمارها به مدت 24 روز از روز القای OA به میزان 15-17 گرم در هر 190-210 گرم وزن بدن به صورت روزانه ادامه یافت.
2.5. اندازه گیری تحمل وزن
پس از القای OA، اندازه‌گیری ظرفیت تحمل وزن اندام‌های عقبی موش‌ها با دستگاه Incapacitance-MeterTester600 (IITC Life Science، Woodland Hills، CA، USA) طبق برنامه انجام شد. توزیع وزن در اندام های عقبی محاسبه شد: ظرفیت تحمل وزن (%)
